胚胎冷凍保存方法有哪些？了解下

  胚胎冷凍保存是將胚胎保存在—196~C超低溫的液氮中做長(zhǎng)期保存?？墒古咛ヒ浦膊皇軙r(shí)間地點(diǎn)的限制，從而達(dá)到提高胚胎移植效率，長(zhǎng)期保存優(yōu)良基因的目的。今天，我們就來(lái)介紹下現(xiàn)有的胚胎冷凍方法。

  現(xiàn)有的胚胎冷凍方法有三種：

  ①常規(guī)冷凍法：也叫慢速冷凍法、逐步降溫法。將采集到的胚胎用培養(yǎng)液洗滌后置入有不同冷凍保護(hù)劑(甘油或二甲亞楓(DMSO)等)濃度的三種冷凍液中(冷凍液濃度由低到高，終濃度1.4M)，每種冷凍液中平衡5分鐘，然后將胚胎和冷凍液裝入細(xì)管中封口、標(biāo)記，放入冷凍儀中進(jìn)行冷凍。冷凍速率先以1～3~C/分下降至-6～-7℃，在此溫度誘發(fā)結(jié)晶，平衡10分鐘，然后，以0.3℃/分的速率降溫至-35～_38℃，之后投入液氮中保存。胚胎解凍后，需按胚胎進(jìn)入冷凍液時(shí)的相反濃度，即從高到低濃度脫除冷凍保護(hù)劑，每步5分鐘，后置入含20%血清的PBS保護(hù)液中洗滌3次，徹底脫除冷凍保護(hù)劑。或者將解凍后的胚胎放入0.5M(或1.0M)的蔗糖溶液中平衡10分鐘，再用上述PBS液洗滌3次。

  ②一步冷凍法：也叫一步細(xì)管法。該方法是由慢速冷凍法改進(jìn)而來(lái)，細(xì)管內(nèi)的冷凍液和蔗糖液是分開的，因此，在細(xì)管內(nèi)用蔗糖液可一步脫除甘油抗凍劑，從而利于在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。

  ③玻璃化冷凍法：是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新的方法。將胚胎在適當(dāng)?shù)睦鋬霰Ｗo(hù)劑混合液中作短暫處理后，直接投入液氮。冷凍保護(hù)劑在急劇降溫到很低溫度時(shí)能被濃縮而不結(jié)晶，而且液體的粘性增強(qiáng)，由液態(tài)變?yōu)橥该鞯墓虘B(tài)，形成玻璃化。用這種方法冷凍，無(wú)需凍前分步添加抗凍劑和凍后分步脫除抗凍劑的繁瑣步驟，簡(jiǎn)化了冷凍過(guò)程，是一種簡(jiǎn)便、快速、的冷凍方法，不需要冷凍儀器。

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